RESUMO No presente trabalho, foi avaliado o efeito imunomodulador de diferentes doses de talidomida em macrófagos associados ao tumor (TAMs), em um modelo murino de câncer de mama. Camundongos foram inoculados com células 4T1, na região do flanco esquerdo, e tratados com talidomida, uma vez ao dia, nas doses de 50, 100 e 150mg/k, por massa corporal, do quinto dia ao 28º dia de inoculação tumoral. Os tumores foram medidos, o índice de proliferação celular e a contagem de TAMs foram avaliados nos tumores primários e nos pulmões com metástases. Além disso, a taxa de metástases pulmonares também foi avaliada. A talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente o crescimento tumoral, o índice de proliferação celular e a infiltração de TAMs nos tumores primários. Por outro lado, maior número de TAMs e menor índice de proliferação celular foram observados nos pulmões metastáticos, em camundongos tratados com 150mg/kg de talidomida. Ademais, a talidomida na dose de 150mg/kg diminuiu significativamente os nódulos metastáticos nos pulmões. Os resultados demonstraram que o tratamento com talidomida diminuiu o crescimento tumoral e as metástases pulmonares em camundongos, associado com diferentes efeitos na infiltração de TAMs nesses locais.

ABSTRACT The present work evaluated the immunomodulatory effect of thalidomide (Thal) at different doses on tumor-associated macrophages (TAMs) using a mouse model of human breast cancer. Mice were inoculated with 4T1 cells in the left flank and treated with Thal once a day at concentrations of 50, 100, and 150mg/kg body weight from the 5th day until the 28th day of tumor inoculation. The tumors were sized, proliferation index and TAMs count were evaluated in primary tumors and metastatic lungs. In addition, the metastasis rate was evaluated in the lungs. Thal at 150mg/kg significantly decreased tumor growth, proliferation index, and TAMs infiltration in primary tumors. Conversely, a higher number of TAMs and lower proliferation index were observed in metastatic lungs in mice treated with 150mg/kg of Thal. Furthermore, Thal at 150mg/kg significantly decreased the metastatic nodules in the lungs. Our findings demonstrated that Thal treatment considerably decreased the primary tumor and lung metastasis in mice associated with different TAM infiltration effects in these sites.

Cães machos, adultos, mestiços, foram transplantados com células do tumor venéreo transmissível canino (TVTC), na região hipogástrica. Foram coletados doze espécimes do TVTC, sendo metade durante a fase proliferativa e metade durante a fase regressiva. Fragmentos do tumor foram fixados em formol a 10%, tamponado e processado rotineiramente para microscopia de luz. Secções de 4µm foram coradas pelo Shorr, ou pela AgNOR, ou ainda, imunocorado para MIB 1 (Ki67). As colorações pelo Shorr, AgNOR, ou MIB 1 mostraram um aumento do índice mitótico, coloração da proteína argirofílica nuclear e células tumorais ciclando em tumores em crescimento, respectivamente. Todos os três marcadores de proliferação celular foram capazes de distinguir o TVTC em ambas as fases de evolução. O anticorpo monoclonal MIB 1 foi o melhor na avaliação morfológica, de crescimento e regressão do TVTC. Isto resultou em um valor maior que a contagem de AgNOR e do índice mitótico. A imunomarcação com MIB1 foi o parâmetro mais efetivo da atividade proliferativa. No entanto, só foi observada uma correlação positiva entre a contagem de mitose e a AgNOR.

Adult male mongrel dogs were subcutaneously transplanted with the canine transmissible venereal tumor (TVT) on the hypogastric region. Twelve specimens of tumors were collected, half during the proliferative phase and the other half during the regressive phase. Fragments of the tumor were fixed in 10% buffered formalin and routinely processed for light microscopy. Sections of 4µm were stained by Schorr or AgNOR or either immunostained for MIB1 (Ki67). Schorr stain, AgNOR and MIB1 showed an increased proliferative activity through mitotic index, nuclear argyrophilic protein stain and cycling tumoral cells in the growing tumors, respectively. All of the three cell proliferation markers were able to distinguish the TVT in both evolution phases. MIB1 monoclonal antibody was the best in the morphologic evaluation of growth and regression of TVT. This resulted in higher values than AgNORs counting and mitotic index. MIB1 immunostaining was the most effective parameter of the proliferative activity of TVT. However, a significant correlation has been detected only between mitosis counting and AgNORs.

Determinaram-se a apoptose e a atrofia no timo de oito cães novos, inoculados experimentalmente com o vírus de cinomose. Três cães saudáveis foram usados como controle negativo. Secções coradas pelo Shorr foram avaliadas por morfometria. A nucleoproteína viral foi detectada por imunoistoquímica. Os resultados morfométricos confirmaram a hipotrofia e mostraram que o timo dos cães inoculados tinha mais estroma, menos parênquima e maior índice apoptótico/campo que o dos animais-controle. Pode-se concluir que a apoptose desempenha importante papel no mecanismo de hipotrofia tímica que se desenvolve na cinomose.

The thymic morphometry analysis was used for determining apoptosis and atrophy of the thymus of eight puppies inoculated with canine distemper virus (CDV). Three healthy dogs were used as negative controls. Sections, 5µm thick, were stained by HE and Shorr, and the latter were evaluated by morphometry. CDV nucleoprotein was detected by immunohistochemistry. Morphometric results confirmed lymphoid hypotrophy in CDV inoculated dog thymuses, more stroma, less parenchyma and higher apoptotic index/field than negative control (not inoculated) puppies. Apoptosis plays a role in the mechanism of thymus atrophy that develops in canine distemper.

Estudou-se a ocorrência de apoptose nos placentomos de cabras gestantes intoxicadas experimentalmente com o cipó-preto (Tetrapterys multiglandulosa A.Juss.). Analisou-se morfometricamente a intensidade do processo de apoptose nas células trofoblásticas em cabras controle (grupo III) e em animais submetidos a diferentes dosagens (grupos I e II) de cipó-preto. O grupo I foi composto por quatro cabras gestantes que receberam 10gramas/kg de peso vivo de folhas verdes da referida planta. No grupo II, quatro cabras gestantes receberam 20 gramas/kg de peso vivo de folhas verdes. A quantificação morfométrica da apoptose demonstrou que nas cabras tratadas a apoptose ocorreu com maior intensidade quando comparada com a obtida em animais do grupo-controle. Diferentes dosagens da planta (10 e 20g/kg PV) não foram um fator determinante para a maior ou menor ocorrência de apoptose, apesar de acarretar morte fetal e subseqüente aborto em momentos diferentes. A intensa apoptose em fase ainda inicial da gestação compromete funções normais da placenta, possibilitando uma explicação para a morte fetal e aborto observadas. Conclui-se que a T. multiglandulosa é tóxica para cabras gestantes nas doses de 10 e 20g/kg peso vivo ingeridas durante seis e duas semanas, respectivamente.

The role of apoptosis in the pathogenesis of placental dysfunction was studied in pregnant goats experimentally intoxicated with cipó-preto (Tetrapterys multiglandulosa A.Juss.). Twelve animals were distributed in three groups, each one with four pregnant goats. Group I was fed 10g/kg of live weight and group II was fed 20g/kg of live weight and group III was used as control. Although apoptosis occurred in placental cells of all the animals, morphometric analyses demonstrated that goats fed with cipó-preto showed higher apoptotic indices than controls. However no difference could be detected between groups I and II. Different amounts of the plant were not a determinant factor to increase the intensity of apoptosis in the placental tissue, although the final result was fetal death and/or abortion at different moments. Intense apoptosis during the early stage of pregnancy may be detrimental for the normal development and function of the placenta and may help to explain the fetal death and abortion observed. Therefore Tetrapterys multiglandulosa is toxic to pregnant goats when ingested at 10 or 20g/kg of live weight during six or two weeks, respectively.